旋毛虫成虫排泄-分泌蛋白对脓毒症急性肝损伤的保护作用及机制研究

摘要：目的 观察旋毛虫(Trichinella spiralis)成虫排泄-分泌蛋白(adult-worm excretory-secretory protein,AES)对小鼠脓毒症急性肝损伤的保护作用. 方法 24只雄性BALB/c小鼠采用抽签法随机分为假手术组(Sham组)、盲肠结扎穿孔组(CLP组)、AES治疗组(AES+CLP组)和AES对照组(AES+Sham组),每组6只.CLP组和AES+CLP组采用盲肠结扎穿孔术制备脓毒症急性肝损伤动物模型,Sham组和AES+ Sham组不结扎、不穿孔盲肠,其余操作与CLP组相同.术后30 min,Sham组和CLP组腹腔注射PBS,AES+ CLP组和AES+Sham组腹腔注射AES(25 μg/只).术后12 h,检测小鼠血清中丙氨酸转氨酶(ALT)和天门冬氨酸转氨酶(AST)水平,观察小鼠肝脏组织病理改变,蛋白质印迹(Western blotting)测定肝脏组织中Toll样受体4(TLR4)、髓样分化因子88 (MyD88)的表达水平,免疫组化法测定肝细胞核因子-κB (NF-κB) p65的表达水平并分析NF-κB p65核阳性率,ELISA检测小鼠肝脏组织中α肿瘤坏死因子(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)和IL-1β的水平. 结果 术后12 h,CLP组小鼠血清中ALT和AST水平分别为(269.83±77.60)和(712.00±186.52)IU/L,明显高于Sham组的(45.00±15.01)和(132.50±36.95) IU/L,及AES+CLP组的(136.67±30.27)和(419.00±60.86) IU/L (P＜ 0.05);AES+ Sham组分别为(50.83±13.24)和(134.67±35.78) IU/L,与Sham组比较差异无统计学意义(P＞0.05).HE染色显示:CLP组肝索紊乱,肝细胞水肿,有炎性细胞浸润;AES+ CLP组肝脏结构损伤明显减轻.Western blotting检测显示:CLP组小鼠术后肝脏组织中TLR4/β-actin和MyD88/β-actin相对表达量分别为0.66±0.12和0.69±0.13,明显高于Sham组的0.31±0.06和0.22±0.04 (P＜ 0.05);AES+CLP组TLR4/β-actin相对表达量为0.56±0.09,与CLP组的比较差异无统计学意义(P＞0.05),而MyD88/β-actin相对表达量为0.47±0.06,较CLP组降低(P＜0.05).免疫组化分析结果显示:CLP组肝细胞中NF-κB p65核阳性率为(18.93±2.91)％,明显高于Sham组的(0.50±0.21)％及AES+CLP组的(9.60±1.59)％(P＜0.05). ELISA检测结果显示:CLP组小鼠肝脏组织中TNF-α、IL-6和IL-1β水平分别是(26.21±2.96)、(80.80±9.94)和(28.99±3.70) pg/mg,明显高于Sham组的(15.42±1.21)、(47.70±4.77)和(16.86±1.68) pg/mg,及AES+CLP组的(18.93±2.04)、(61.82±7.24)和(23.18±2.21) pg/mg (P＜0.05). 结论 AES可通过降低肝脏组织中MyD88表达和NF-κB p65核阳性率,从而降低肝脏组织中TNF-α、IL-6和IL-1β水平,减轻脓毒症对肝脏的损伤.