期刊简介
本刊为专业学术性刊物。主要报道有关人体寄生虫学与寄生虫病的科研成果和防治经验，介绍新理论、新技术和新进展。主要读者对象为寄生虫学与寄生虫病专业的研究、防治、教学人员及医务工作者。
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首页>中国寄生虫学与寄生虫病杂志
- 杂志名称：中国寄生虫学与寄生虫病杂志
- 主管单位：中华人民共和国国家卫生和计划生育委员会
- 主办单位：中华预防医学会,中国疾病预防控制中心寄生虫病预防控制所
- 国际刊号：1000-7423
- 国内刊号：31-1248/R
- 出版周期：双月刊
期刊荣誉：中华预防医学会先进编辑部（97）；中华预防医学会优秀期刊一等奖（00）；中华预防医学会优秀期刊二等奖（01）；中华预防医学会优秀期刊三等奖（01-02）期刊收录：CA 化学文摘(美), 万方收录(中), 维普收录(中), 北大核心期刊(中国人文社会科学核心期刊), 国家图书馆馆藏, 知网收录(中), CSCD 中国科学引文数据库来源期刊(含扩展版), 文摘与引文数据库, 统计源核心期刊(中国科技论文核心期刊), 上海图书馆馆藏, JST 日本科学技术振兴机构数据库(日)
利用sgRNA串联表达框架编辑恶性疟原虫K13和NUP116基因的研究
孟令文；赵月蒙；夏惠；方强；张青锋
关键词：恶性疟原虫, CRISPR/Cas9系统, 基因编辑
摘要：目的 利用单链引导RNA (sgRNA)串联表达框架编辑恶性疟原虫(Plasmodium falciparum)K13和NUP116基因.方法 根据恶性疟原虫K13和NUP116基因序列设计引物,PCR扩增K13和NUP116基因的同源臂,并引入突变位点.PCR串联基因K13和NUP116的sgRNA,将同源臂和串联的sgRNA与载体pL6cs连接,构建用于电击转染实验的载体pL6-K13-NUP116,将其与表达Cas9蛋白的质粒一同通过电击转染法,转入恶性疟原虫体内,利用成簇的规律间隔的短回文重复序列及其相关蛋白9 (CRISPR/Cas9)系统对基因进行编辑修饰,通过筛选药物二氢叶酸还原酶抑制剂(WR)和杀稻瘟菌素(BSD)筛选转基因疟原虫,提取转基因疟原虫的基因组,对其进行PCR检测,终通过测序鉴定K13和NUP116基因是否成功被突变修饰.结果 PCR扩增出K13和NUP116串联的同源臂(K13全长557 bp,NUP116全长569 bp)以及串联的sgRNA,与载体pL6cs连接后成功获得用于电击转染实验的表达载体pL6-K13-NUP116.电击转染后通过药物筛选转基因疟原虫,培养至第28天涂片镜检发现疟原虫.PCR检测结果显示,转基因疟原虫K13和NUP116基因突变修饰成功.测序表明,K13和NUP116基因的目标位点被成功突变.结论 基于CRISPR/Cas9编辑技术的串联sgRNA表达载体可同时对恶性疟原虫K13和NUP116基因进行编辑.
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