期刊简介
本刊为专业学术性刊物。主要报道有关人体寄生虫学与寄生虫病的科研成果和防治经验，介绍新理论、新技术和新进展。主要读者对象为寄生虫学与寄生虫病专业的研究、防治、教学人员及医务工作者。
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首页>中国寄生虫学与寄生虫病杂志
- 杂志名称：中国寄生虫学与寄生虫病杂志
- 主管单位：中华人民共和国国家卫生和计划生育委员会
- 主办单位：中华预防医学会,中国疾病预防控制中心寄生虫病预防控制所
- 国际刊号：1000-7423
- 国内刊号：31-1248/R
- 出版周期：双月刊
期刊荣誉：中华预防医学会先进编辑部（97）；中华预防医学会优秀期刊一等奖（00）；中华预防医学会优秀期刊二等奖（01）；中华预防医学会优秀期刊三等奖（01-02）期刊收录：CA 化学文摘(美), 万方收录(中), 维普收录(中), 北大核心期刊(中国人文社会科学核心期刊), 国家图书馆馆藏, 知网收录(中), CSCD 中国科学引文数据库来源期刊(含扩展版), 文摘与引文数据库, 统计源核心期刊(中国科技论文核心期刊), 上海图书馆馆藏, JST 日本科学技术振兴机构数据库(日)
细粒棘球绦虫转醛醇酶基因的克隆、表达及其潜在免疫诊断价值的研究
辛奇；景涛；宋晓霞；高海军；孙旭东；吕薇；Nabil Pervaiz；鲁俊
关键词：细粒棘球绦虫, 转醛醇酶基因, 克隆表达, 免疫诊断, 药物靶点
摘要：目的 对细粒棘球绦虫转醛醇酶(Echinococcus granulosus transaldolase,EgTAL)编码基因进行生物信息学分析、克隆和表达,并对其作为药物靶标及其潜在的免疫诊断价值进行初步评价. 方法 运用多种软件分析EgTAL的理化性质、保守功能域、同源性和三级结构等.从重组质粒pBluescriptⅡSK Egtal中PCR扩增Egtal基因,克隆至pET30a,构建表达载体pET30a-Egtal,转化大肠埃希菌(Escherichia coli) BL21 (DE3),异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析表达产物,抗His标签镍亲和层析柱纯化重组蛋白EgTAL,与细粒棘球蚴病患者血清进行蛋白质印迹(Western blotting)分析.用20份已确诊的细粒棘球蚴病患者血清和20份健康者血清,ELISA法评价重组蛋白EgTAL的免疫诊断效果.分光光度法检测重组蛋白EgTAL的酶活性. 结果 Egtal基因长981 bp,编码的蛋白含326个氨基酸,理论相对分子质量(Mr)为36 332,等电点为5.11,含TAL标识序列DATTNPSLI (31～39 aa)及酶活性催化部位,EgTAL与人TAL的同源性为62％.三级结构分子建模显示,EgTAL具有A和B两条完整的蛋白链.成功构建重组质粒pET30a-Egtal.SDS-PAGE和Western blotting分析结果显示,重组蛋白EgTAL在E.coli BL21 (DE3)中获得高效表达,在Mr 36 332处可见重组蛋白EgTAL条带,主要以可溶性形式存在,EgTAL可被细粒棘球蚴病患者血清识别.ELISA分析结果显示,20份细粒棘球蚴病患者血清和20份健康者血清的平均A450值分别为1.189±0.384和0.325±0.078,其中17份细粒棘球蚴病患者血清检测结果为阳性.酶活性检测结果显示,纯化后的EgTAL具有高效酶活性,60μg EgTAL加入酶促反应体系催化反应30 min后,体系的吸光度(A 340值)由1.684±0.103降至0.139±0.009. 结论 克隆了细粒棘球绦虫Egtal基因,并在E.coli BL21 (DE3)中表达出有酶催化活性和潜在免疫诊断价值的EgTAL重组蛋白.
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