期刊简介
本刊为专业学术性刊物。主要报道有关人体寄生虫学与寄生虫病的科研成果和防治经验，介绍新理论、新技术和新进展。主要读者对象为寄生虫学与寄生虫病专业的研究、防治、教学人员及医务工作者。
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首页>中国寄生虫学与寄生虫病杂志
- 杂志名称：中国寄生虫学与寄生虫病杂志
- 主管单位：中华人民共和国国家卫生和计划生育委员会
- 主办单位：中华预防医学会,中国疾病预防控制中心寄生虫病预防控制所
- 国际刊号：1000-7423
- 国内刊号：31-1248/R
- 出版周期：双月刊
期刊荣誉：中华预防医学会先进编辑部（97）；中华预防医学会优秀期刊一等奖（00）；中华预防医学会优秀期刊二等奖（01）；中华预防医学会优秀期刊三等奖（01-02）期刊收录：CA 化学文摘(美), 万方收录(中), 维普收录(中), 北大核心期刊(中国人文社会科学核心期刊), 国家图书馆馆藏, 知网收录(中), CSCD 中国科学引文数据库来源期刊(含扩展版), 文摘与引文数据库, 统计源核心期刊(中国科技论文核心期刊), 上海图书馆馆藏, JST 日本科学技术振兴机构数据库(日)
刚地弓形虫入侵宿主细胞过程中棒状体蛋白16的分泌与分布
姜诗晨；魏海霞；何成；邓胜群；夏菁；彭鸿娟
关键词：刚地弓形虫, 棒状体蛋白16, 多克隆抗体, 制备, 实时荧光定量PCR, 间接免疫荧光, 蛋白质印迹
摘要：目的 观察刚地弓形虫(Toxoplasma gondii)不同毒力株的棒状体蛋白16 (ROP16)在入侵宿主细胞过程中的分泌及分布. 方法 以刚地弓形虫RH株速殖子cDNA为模板,PCR扩增Tgrop 16基因,克隆至pET-32a(+)载体,在大肠埃希菌(Escherichiacoli) BL21 (DE3)中经异丙基币-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达.重组蛋白TgROP16经纯化后免疫新西兰大白兔,制备抗TgROP16多克隆抗体,用蛋白质印迹(Western blotting)和间接ELISA检测抗TgROP 16多克隆抗体的特异性和敏感性.用实时荧光定量PCR (real-time PCR)检测刚地弓形虫RH株和Pru株速殖子Twop16基因的转录水平,Western blotting分析RH株和Pru株TgROP16蛋白的表达量.用间接免疫荧光(IFA)检测弓形虫RH株和Pru株速殖子在入侵人包皮成纤维细胞(HFFs细胞)过程中,TgROP16蛋白在宿主细胞中的分泌与分布. 结果 制备的抗TgROP16多克隆抗体,Western blotting分析结果显示,能与重组蛋白TgROP16结合,在相对分子质量(Mt)约100 000处有一特异性条带;间接ELISA检测结果显示,抗体效价为1∶25 600.实时荧光定量PCR检测结果显示,Pru株Tgrop 16基因表达量(7.786±0.206)是RH株(1.000±0.110)的7倍(P＜0.05).Western blotting分析结果显示,RH株中TgROP16蛋白表达量(TgROP16与其内参TgTubulin的灰度比值为0.373)较高于Pru株(TgROP16与其内参TgTubulin的灰度比值为0.232).IFA检测结果显示,RH株和Pru株速殖子在入侵HFFs细胞前,TgROP 16蛋白定位于速殖子的顶端复合体,速殖子入侵HFFs细胞后,TgROP16蛋白显示在虫体外. 结论 制备的抗TgROP16多克隆抗体特异性和敏感性高;刚地弓形虫RH株速殖子的TgROP16蛋白表达量高于Pru株的;两株速殖子在入侵HFFs细胞前,TgROP16蛋白分布于速殖子顶端复合体,在入侵宿主细胞过程中被分泌出虫体.
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