期刊简介
本刊为专业学术性刊物。主要报道有关人体寄生虫学与寄生虫病的科研成果和防治经验，介绍新理论、新技术和新进展。主要读者对象为寄生虫学与寄生虫病专业的研究、防治、教学人员及医务工作者。
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首页>中国寄生虫学与寄生虫病杂志
- 杂志名称：中国寄生虫学与寄生虫病杂志
- 主管单位：中华人民共和国国家卫生和计划生育委员会
- 主办单位：中华预防医学会,中国疾病预防控制中心寄生虫病预防控制所
- 国际刊号：1000-7423
- 国内刊号：31-1248/R
- 出版周期：双月刊
期刊荣誉：中华预防医学会先进编辑部（97）；中华预防医学会优秀期刊一等奖（00）；中华预防医学会优秀期刊二等奖（01）；中华预防医学会优秀期刊三等奖（01-02）期刊收录：CA 化学文摘(美), 万方收录(中), 维普收录(中), 北大核心期刊(中国人文社会科学核心期刊), 国家图书馆馆藏, 知网收录(中), CSCD 中国科学引文数据库来源期刊(含扩展版), 文摘与引文数据库, 统计源核心期刊(中国科技论文核心期刊), 上海图书馆馆藏, JST 日本科学技术振兴机构数据库(日)
刚地弓形虫529bp重复序列环介导等温扩增检测方法的建立
徐前明；袁恒青；赵长城；方芬；刘喆；宁红蕊；石大丽；李郁；王海洋
关键词：刚地弓形虫, 529bp重复序列, 环介导扩增, 建立
摘要：目的 建立高效检测刚地弓形虫(Toxoplama gondii)的环介导等温扩增(LAMP)方法,为弓形虫病诊断提供新的技术手段. 方法 采用在线引物设计软件Primer Explorer 4.0设计弓形虫529 bp基因LAMP扩增引物,用已构建的pMD-19T-529 bp重组质粒为模板,建立LAMP扩增反应,通过添加环引物、设置不同浓度的甜菜碱和MgS04以及不同反应温度对扩增反应体系和反应条件进行优化.以猪、微小隐孢子虫(Cryptosporidium parvum)、猪等孢球虫(Isospora suis)的基因组DNA和超纯水为对照,pMD-19T-529 bp重组质粒为模板,分别进行优化后的LAMP和PCR扩增,评价LAMP方法的特异性.将pMD-19T-529 bp重组质粒梯度稀释为109～100 copies/ml,分别进行优化后的LAMP和PCR扩增,评价LAMP方法的灵敏性. 结果 设计的LAMP扩增引物可扩增出弓形虫529 bp序列保守区域的目的片段.优化结果显示,佳反应总体系为25μl,其中,甜菜碱佳浓度为0.4 mol/L,MgSO4佳浓度为6 mmol/L;添加环引物反应30 min的扩增效率与未添加环引物反应60 min的扩增效率相当,可使反应时间缩短30 min;佳反应条件为63℃30 min,80℃3 min.特异性检测结果显示,所建立的LAMP方法可特异扩增弓形虫529 bp基因片段, 对照均未扩增出目的片段.灵敏性检测结果显示,LAMP方法的低检出值达103 copies/ml,效率为PCR扩增(104 copies/ml)的10倍. 结论 建立了弓形虫529 bp重复序列的LAMP检测方法,该法具有较好的特异性和灵敏性.
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