期刊简介
本刊为专业学术性刊物。主要报道有关人体寄生虫学与寄生虫病的科研成果和防治经验，介绍新理论、新技术和新进展。主要读者对象为寄生虫学与寄生虫病专业的研究、防治、教学人员及医务工作者。
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首页>中国寄生虫学与寄生虫病杂志
- 杂志名称：中国寄生虫学与寄生虫病杂志
- 主管单位：中华人民共和国国家卫生和计划生育委员会
- 主办单位：中华预防医学会,中国疾病预防控制中心寄生虫病预防控制所
- 国际刊号：1000-7423
- 国内刊号：31-1248/R
- 出版周期：双月刊
期刊荣誉：中华预防医学会先进编辑部（97）；中华预防医学会优秀期刊一等奖（00）；中华预防医学会优秀期刊二等奖（01）；中华预防医学会优秀期刊三等奖（01-02）期刊收录：CA 化学文摘(美), 万方收录(中), 维普收录(中), 北大核心期刊(中国人文社会科学核心期刊), 国家图书馆馆藏, 知网收录(中), CSCD 中国科学引文数据库来源期刊(含扩展版), 文摘与引文数据库, 统计源核心期刊(中国科技论文核心期刊), 上海图书馆馆藏, JST 日本科学技术振兴机构数据库(日)
刚地弓形虫尿苷磷酸化酶的克隆、表达与免疫反应性检测
殷丽天；祝建疆；李润花；王海龙；李雅清；殷国荣
关键词：刚地弓形虫, 尿苷磷酸化酶, 生物信息学分析, 基因克隆, 原核表达, 免疫反应性
摘要：目的 预测刚地弓形虫尿苷磷酸化酶(uridine phosphorylase,TgUPase)基因编码蛋白的主要特性和抗原表位,克隆、表达TgUPase基因,并检测其免疫反应性. 方法 采用生物信息学在线分析程序和软件预测TgU-Pase蛋白的理化性质和抗原表位.提取RH株弓形虫速殖子总RNA.根据TgUPase基因全长编码序列(GenBank登录号为DQ385446.1)的开放阅读框设计引物,并用RT-PCR扩增,扩增产物经双酶切后连接人pET-30a(+)载体.用重组质粒转化大肠埃希菌(E coli) DH5αt,阳性菌落经PCR、双酶切和测序鉴定.将重组质粒pET-30a (+)-TgUPase转化至E coli BL21(DE3),并加入异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达.十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)结合考马斯亮蓝染色检测表达产物,分别以抗His标签抗体和人抗弓形虫血清为一抗,蛋白质印迹(Western blotting)分析重组蛋白及其免疫反应性. 结果 生物信息学预测结果显示,TgUPase蛋白由303个氨基酸组成,相对分子质量(Mr)为33 042.9,为可溶性蛋白,有3个潜在的T/B细胞联合抗原表位.RT-PCR扩增产物约为921 bp.菌落PCR、双酶切以及测序结果表明,重组质粒pET-30a (+)-TgUPase构建成功.SDS-PAGE结果表明,经IPTG诱导获得约Mr 38000的可溶性重组蛋白(带His标签).Western blotting结果显示,重组蛋白能被His标签抗体和人抗弓形虫血清识别.结论 成功构建了重组质粒pET-30a(+)-TgUPase,获得刚地弓形虫重组尿苷磷酸化酶,且重组蛋白具有免疫反应性.
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