粉尘螨变应原Der f 1 mRNA对小鼠特异性免疫治疗的实验研究

摘要：目的 探讨粉尘螨变应原Derf1mRNA疫苗对哮喘小鼠的特异性免疫治疗效果.方法 50只BALB/c小鼠随机分为5组(10只/组),分别为PBS组、Derf1变应原致敏组、Derf1变应原免疫治疗组、β-actin mRNA免疫治疗组和Derf1 mRNA免疫治疗组.分别于第0、第7和第14天,PBS组小鼠腹腔注射PBS,其余4组小鼠则腹腔注射10 μgDer f 1进行致敏,建立小鼠哮喘模型.自第21天起,除PBS组小鼠雾化吸入PBS,其他4组小鼠均雾化吸入100 μg/mlDerf1变应原,30 min/次,1次/d,连续7d,观察并记录小鼠哮喘发作情况.5组小鼠于后1次雾化吸入致敏2周后,背部皮下分别注射100 μl PBS、1μg Derf1(维持致敏)、10 μg Derf1(免疫治疗)、2μg β-actin mRNA和2μg Derf1mRNA,1次/周,连续3周.后1次皮下注射后2周处死小鼠.收集各组小鼠的支气管肺泡灌洗液(BALF),ELISA法检测γ干扰素(IFN-γ)和白介素13 (IL-13)水平,并计数嗜酸粒细胞(EOS);收集各组小鼠脾组织,分离脾细胞,除PBS组外,其他4组均加入10 μg/ml Der f 1培养72 h,ELISA法检测脾细胞培养上清液中IFN-γ和IL-13水平;取各组小鼠眼球血,ELISA法检测血清中总IgE以及变应原特异性IgE (sIgE)、IgG1(sIgG1)和IgG2a (sIgG2a)抗体水平.HE染色观察各组小鼠肺组织切片. 结果 除PBS组外,其他4组小鼠雾化吸入致敏后,均出现急性哮喘发作症状.小鼠BALF中,Derf 1 mRNA免疫治疗组和Derf 1免疫治疗组的IFN-γ水平分别为(897.56±105.73)和(864.48±70.62) pg/ml,均明显高于Derf 1变应原致敏组[(209.05±52.28) pg/ml]和β-actin mRNA免疫治疗组[(219.47±64.72) pg/ml](P＜0.01);两者IL-13水平分别为(241.64±31.41)和(321.94±41.07) pg/ml,则明显低于Derf1变应原致敏组[(520.62±43.77) pg/ml]和β-actin mRNA免疫治疗组[(507.22±42.26) pg/ml] (P＜0.01);两者EOS数量分别为(1.33±0.44) ×105和(1.48±0.39) ×105个/ml,均明显低于Derf1变应原致敏组[(3.54±0.52) ×105个/ml]和β-actin mRNA免疫治疗组[(2.98±0.53)×105 个/ml](P＜0.01).脾细胞培养上清的ELISA检测结果显示,Derf 1 mRNA免疫治疗组和Derf 1免疫治疗组的IFN-γ水平分别为(420.91±69.92)和(334.92±43.72) pg/ml,明显高于Derf1变应原致敏组[(123.75±15.48) pg/ml]和β-actin mRNA免疫治疗组[(128.84±59.00) pg/ml](P＜0.01);两者IL-13水平[(268.51±40.42)和[(285.26±62.21) pg/ml]则显著低于Derf1变应原致敏组[(613.89.±.51.54) pg/ml]和β-actin mRNA免疫治疗组[(524.05±39.12) pg/ml] (P＜0.01).血清中抗体水平的ELISA检测结果显示,Derf 1 mRNA免疫治疗组的总IgE、sIgE和sIgG1抗体水平分别为(33.72±9.78)、(22.76±8.09)和(17.87±7.59) ng/ml,均显著低于Derf1变应原致敏组[(94.34±11.66)、(65.67±9.47)和(75.18±9.52)ng/ml]和β-actin mRNA免疫治疗组[(86.48±10.26)、(62.36±8.35)和(69.51±8.98) ng/ml] (P＜0.01);其sIgG2a抗体水平为(7.74±0.88) ng/ml,则明显高于Derf1变应原致敏组[(2.81±1.17) ng/ml]和β-actin mRNA免疫治疗组[(1.06±0.11) ng/ml](P＜0.01).肺组织切片HE染色镜检结果显示,与Derf1变应原致敏组相比,Derf1 mRNA免疫治疗组小鼠的气道上皮和肺泡上皮细胞结构基本完整,炎症细胞浸润明显减少.结论 Derf1mRNA疫苗可有效纠正Th1/Tn2失衡.