期刊简介
本刊为专业学术性刊物。主要报道有关人体寄生虫学与寄生虫病的科研成果和防治经验，介绍新理论、新技术和新进展。主要读者对象为寄生虫学与寄生虫病专业的研究、防治、教学人员及医务工作者。
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首页>中国寄生虫学与寄生虫病杂志
- 杂志名称：中国寄生虫学与寄生虫病杂志
- 主管单位：中华人民共和国国家卫生和计划生育委员会
- 主办单位：中华预防医学会,中国疾病预防控制中心寄生虫病预防控制所
- 国际刊号：1000-7423
- 国内刊号：31-1248/R
- 出版周期：双月刊
期刊荣誉：中华预防医学会先进编辑部（97）；中华预防医学会优秀期刊一等奖（00）；中华预防医学会优秀期刊二等奖（01）；中华预防医学会优秀期刊三等奖（01-02）期刊收录：CA 化学文摘(美), 万方收录(中), 维普收录(中), 北大核心期刊(中国人文社会科学核心期刊), 国家图书馆馆藏, 知网收录(中), CSCD 中国科学引文数据库来源期刊(含扩展版), 文摘与引文数据库, 统计源核心期刊(中国科技论文核心期刊), 上海图书馆馆藏, JST 日本科学技术振兴机构数据库(日)
刚地弓形虫苹果酸脱氢酶基因的克隆表达及免疫原性分析
刘转转；杨燕萍；殷国荣；王海龙；李雅清；祝建疆；刘宜升
关键词：刚地弓形虫, 苹果酸脱氢酶, 原核表达, 免疫原性
摘要：目的 克隆、表达刚地弓形虫苹果酸脱氢酶(TgMDH)基因,并分析其免疫原性. 方法 提取弓形虫RH株速殖子总RNA,根据TgMDH的基因编码序列(GenBank登录号为AY650028)设计引物,RT-PCR扩增产物双酶切后连接入pET30a(+)载体,重组质粒转化入大肠埃希菌(E.coli DH5α,经双酶切、PCR和测序鉴定阳性菌落.重组质粒pET30a(+)-TgMDH转化至E.coli BL21,经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)结合考马斯亮蓝染色检测表达产物.优化表达条件,获得大量可溶性蛋白.经镍亲和层析法纯化后滴鼻免疫BALB/c小鼠,制备小鼠抗重组rTgMDH蛋白血清.分别以小鼠抗rTg-MDH血清和兔抗弓形虫血清为一抗,蛋白质印迹(Western blotting)分析rTgMDH蛋白的免疫原性. 结果 Tg-MDH基因RT-PCR扩增产物约为951 bp.经双酶切、PCR和测序结果显示重组质粒pET30a(+)-TgMDH构建成功.SDS-PAGE结果显示,经IPTG诱导获得相对分子质量(Mr)约36 000的可溶性重组蛋白.Western blotting分析结果显示,rTgMDH蛋白能被该蛋白免疫的小鼠血清和兔抗弓形虫血清识别. 结论 本研究克隆的TgMDH基因序列能在原核表达系统中高效表达,且具有免疫原性.
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