期刊简介
本刊为专业学术性刊物。主要报道有关人体寄生虫学与寄生虫病的科研成果和防治经验，介绍新理论、新技术和新进展。主要读者对象为寄生虫学与寄生虫病专业的研究、防治、教学人员及医务工作者。
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首页>中国寄生虫学与寄生虫病杂志
- 杂志名称：中国寄生虫学与寄生虫病杂志
- 主管单位：中华人民共和国国家卫生和计划生育委员会
- 主办单位：中华预防医学会,中国疾病预防控制中心寄生虫病预防控制所
- 国际刊号：1000-7423
- 国内刊号：31-1248/R
- 出版周期：双月刊
期刊荣誉：中华预防医学会先进编辑部（97）；中华预防医学会优秀期刊一等奖（00）；中华预防医学会优秀期刊二等奖（01）；中华预防医学会优秀期刊三等奖（01-02）期刊收录：CA 化学文摘(美), 万方收录(中), 维普收录(中), 北大核心期刊(中国人文社会科学核心期刊), 国家图书馆馆藏, 知网收录(中), CSCD 中国科学引文数据库来源期刊(含扩展版), 文摘与引文数据库, 统计源核心期刊(中国科技论文核心期刊), 上海图书馆馆藏, JST 日本科学技术振兴机构数据库(日)
IMS-qPCR检测水源性微小隐孢子虫方法的建立
高姗姗；吴绍强；罗静；王承民；张敏；赵宝华；何宏轩
关键词：微小隐孢子虫, 免疫磁珠, 荧光探针定量PCR, 核糖体DNA小亚基
摘要：目的 将免疫磁珠分离技术(IMS)和荧光探针定量PCR (qPCR)相结合,建立水源性微小隐孢子虫卵囊的检测方法. 方法 以抗微小隐孢子虫卵囊表面抗原Cp23单克隆抗体包被链霉素磁珠,制备特异免疫磁珠,根据卵囊回收率优化分离和富集卵囊条件.根据微小隐孢子虫核糖体DNA小亚基(18S rDNA)基因(登录号AB513881.1)序列设计引物和荧光标记探针,以分离纯化后的微小隐孢子虫卵囊基因组DNA为模板进行扩增,将扩增产物克隆至Peasy-T1载体.经筛选鉴定后,将重组质粒倍比稀释至104～ 108 copy/μl,荧光探针定量PCR检测,并绘制标准曲线.用荧光探针定量PCR分别检测微小隐孢子虫、贝氏隐孢子虫、刚地弓形虫、犬隐孢子虫和大肠埃希菌基因组DNA,判断该方法的特异性；检测100～108 copy/μl重组质粒,判断该方法的敏感性.对采自河北某奶牛养殖场的50份污水样品,分别采用免疫荧光分析法(IFA)和IMS-qPCR检测,并比较分析检测结果. 结果 磁珠与Cp23单克隆抗体的佳孵育浓度为20 ng/ml,佳孵育时间为30 min,佳捕获时间为30 min,卵囊的回收率＞95％. PCR扩增产物长度为272 bp,重组质粒经酶切和测序鉴定正确.荧光探针定量PCR结果显示,重组质粒拷贝数与Ct值之间呈现良好的线性关系,相关系数r2=0.996 1.特异性和敏感性检测结果显示,仅微小隐孢子虫有扩增条带,低10 copy/μl微小隐孢子虫卵囊18S rDNA重组质粒可被检测到.以IFA检测结果为金标准,50份水样的检测结果显示,IMS-qPCR的特异性为100％ (18/18),敏感性为93.8％ (30/32). 结论 IMS-qPCR可用于检测水源性微小隐孢子虫卵囊.
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