重组果糖二磷酸醛缩酶SjLAP和亮氨酸氨基肽酶SjFBPA用于日本血吸虫病的诊断和疗效考核的评价

摘要：目的 评价重组亮氨酸氨基肽酶(rSjLAP)和重组果糖二磷酸醛缩酶(rSjFBPA)抗原用于诊断人血吸虫感染以及疗效考核的价值. 方法 异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导pET-28a-rSjLAP/B L21和pET-28a-rSjFBPA/BL21表达目的蛋白,组氨酸标签亲和纯化柱纯化rSjLAP和rSjFBPA蛋白.88只BALB/c雌性小鼠随机分为4组,A、B和C组(各21只小鼠),D组(25只小鼠).A、B和C组分别感染5、15和25条日本血吸虫尾蚴.D组为不感染对照组,在实验的第1天全部处死.A、B和C组在感染后第3、7、10、14、20、30和60天,分别处死小鼠3只,采眼球血制备血清,检测其抗体水平.采用单独或联合rSjLAP和rSjFBPA为抗原,ELISA法检测小鼠血清、急性血吸虫病(38份)和慢性血吸虫病患者(96份)血清中的抗体,以健康人(90份)血清为对照,同时检测华支睾吸虫病(33份)、卫氏并殖吸虫病(40份)和钩虫病患者(37份)血清,并检测急性血吸虫病患者吡喹酮治疗(60 mg/kg,2次/d×2d)后1年的血清(36份)、慢性血吸虫病患者吡喹酮治疗(剂量,疗程同前)后1年(36份)和2年(64份)的血清. 结果 BALB/c小鼠在感染后第10天,rSjLAP和rSjFBPA单独或联合使用均可检测到小鼠血清中的IgG抗体；B组(0.535±0.053,0.595±0.033,0.696±0.104)和C组(0.548±0.060,0.608±0.063,0.621 ±0.090)早期抗体水平明显高于A组(0.415±0.038,0.455±0.056,0.498±0.077)(P＜0.05).用rSjLAP为抗原可检测急性血吸虫病和慢性血吸虫病患者血清,阳性率分别为97.4％ (37/38)和87.5％ (84/96) (P＞0.05);用rSjFBPA为抗原检测,其阳性率分别为94.7％ (36/38)和88.5％ (85/96) (P＞0.05)；用rSjLAP和rSjFBPA联合为抗原检测,则其阳性率分别为94.7％ (36/38)和85.4％ (82/96) (P＞0.05).rSjLAP或联合抗原的特异性均为96.7％ (87/90),而rSjFBPA的特异性为97.8％ (88/90).给予吡喹酮治疗后,rSjLAP和rSjFBPA单独或联合使用检测急性血吸虫病血清(0.236±0.212,0.287±0.191,0.235±0.120)和慢性血吸虫病患者(0.266±0.124,0.261±0.143,0.265±0.140；0.204±0.074,0.176±0.074,0.176±0.073),抗体滴度普遍下降,与对照组(0.188±0.056,0.173±0.045,0.184±0.051)相比,差异无统计学意义(P＞0.05).rSjLAP和rSjFBPA单独为抗原检测华支睾吸虫病患者血清,交叉反应率为15.2％ (5/33)和12.11％ (4/33),两者联合则为9.2％ (3/33).rSjLAP检测卫氏并殖吸虫的交叉反应率为15.0％ (6/40),rSjFBPA为12.5％ (5/40),两种抗原联合检测为15.0％ (6/40).上述抗原单独或联合检测钩虫的交叉反应率均为8.1％(3/37).上述各组阳性率与健康人群之间差异有统计学意义(P＜0.05),显示该重组抗原在其他蠕虫检测中存在一定的交叉反应. 结论 用rSjFBPA和rSjLAP作为抗原的ELISA法诊断血吸虫病具有良好的敏感性和特异性.