期刊简介
本刊为专业学术性刊物。主要报道有关人体寄生虫学与寄生虫病的科研成果和防治经验，介绍新理论、新技术和新进展。主要读者对象为寄生虫学与寄生虫病专业的研究、防治、教学人员及医务工作者。
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首页>中国寄生虫学与寄生虫病杂志
- 杂志名称：中国寄生虫学与寄生虫病杂志
- 主管单位：中华人民共和国国家卫生和计划生育委员会
- 主办单位：中华预防医学会,中国疾病预防控制中心寄生虫病预防控制所
- 国际刊号：1000-7423
- 国内刊号：31-1248/R
- 出版周期：双月刊
期刊荣誉：中华预防医学会先进编辑部（97）；中华预防医学会优秀期刊一等奖（00）；中华预防医学会优秀期刊二等奖（01）；中华预防医学会优秀期刊三等奖（01-02）期刊收录：CA 化学文摘(美), 万方收录(中), 维普收录(中), 北大核心期刊(中国人文社会科学核心期刊), 国家图书馆馆藏, 知网收录(中), CSCD 中国科学引文数据库来源期刊(含扩展版), 文摘与引文数据库, 统计源核心期刊(中国科技论文核心期刊), 上海图书馆馆藏, JST 日本科学技术振兴机构数据库(日)
华支睾吸虫成虫转录辅激活因子基因在原核细胞中的克隆、表达及其生物功能分析
张咏莉；余新炳；吴德；吴忠道；毕惠祥
关键词：华支睾吸虫, 转录辅激活因子基因, 基因重组, 基因克隆, 原核表达
摘要：目的构建华支睾吸虫成虫转录辅激活因子(transcriptional coactivator, TC)基因(TC基因)原核重组质粒, 进行原核表达、鉴定及生物功能分析. 方法根据TC基因已知序列设计1 对引物, 从华支睾吸虫成虫 cDNA 文库中扩增TC基因片段;将目的基因进行聚合酶链反应(PCR), 其产物和空质粒pGEX-4T-1、pET30a(+)同时用限制性内切酶 BamHⅠ、 SalⅠ双酶切, 纯化回收后连接并转化大肠埃希菌( E.coli BL21).将构建的重组质粒pGEX-4T-1-TC和pET30a(+)-TC分别经双酶切、PCR及测序鉴定后在大肠埃希菌BL21中诱导表达.用十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和蛋白质印迹法(Western blotting)鉴定其表达效果, 用亲和层析法纯化重组质粒pET30a(+)-TC表达产生的组氨酸重组蛋白(His-TC). 结果构建了TC基因原核重组质粒pGEX-4T-1-TC和pET30a(+)-TC.SDS-PAGE 结果表明TC基因在大肠埃希菌BL21 系统获得高效表达, 其重组蛋白分子量与理论值相符. Western blotting 结果表明重组质粒pGEX-4T-1-TC表达的谷胱甘肽硫转移酶(GST)重组蛋白(GST-TC)可被华支睾吸虫免疫兔血清识别, 具有免疫反应性. 纯化的TC基因的组氨酸(His)重组蛋白(His-TC)经SDS-PAGE显示单一条带. 结论通过生物信息学方法由华支睾吸虫成虫cDNA文库中筛选出TC基因, 并成功予以克隆、表达及纯化.
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